목차

  1. 11. 동결기의 종류
  2. 22. 동결과정
  3. 33. 동결 융해시 세포사멸 원인
  4. 3.171.0
  5. 3.273.7
  1. 3.355.9
  2. 3.476.1
  3. 3.573.5
  4. 42. 동해 방지제 평형
  5. 53. 스트로우 내 수정란 주입
  6. 5.11.4M
  7. 64. 수정란 동결
  8. 7냉각 완료된 수정란 액체 질소에 침지 보존
  9. 85. 수정란의 융해
  10. 91. 직접 이식법
  11. 103. Glycerol 1단계 제거법(샤렛내 제거법)
  12. 114. Glycerol 3단계 제거법
  13. 125. Glycerol 5단계 제거법

동물생명공학 과제 – 수정란, 핵심 내용을 한눈에

세포내 동해 방지제 : 분자량이 낮고 용해성이 높으며, 수정란에 대하여 독성이 없고 빠른 침투성을 갖고 있을 것 (DMSO, Glycerol, Ethylene glycol 등) 세포외 동해 방지제 : 분자량이 큰것(Sucrose, Glucose등) Glycerol : 동결 융해 후 삼투성 쇼크를 야기시키는 경향이 있 다.

세포사멸, 본문에서 설명한 내용

수정란의 동결

1. 동결기의 종류

액체 질소 동결기 알코올 동결기

2. 동결과정

과냉각 – 빙정핵 형성 – 빙정성장 – 공정점결빙 과냉각 : 용액을 냉각시킬 때 빙점 혹은 그 이하의 온도로 내려가 도 얼지 않고 액체 상태가 유지되어진 상태 식빙(seeding) : 과냉각 상태 용액과 아주 냉각된 금속을 접촉시키 면 과냉각상태가 파괴되고 얼음형성 빙정핵형성 : 첫째과정 – 낮은온도에서 순수물분자의 빙정핵형성 두번째과정 – 용액내 이물질을 중심으로 빙정핵형성 빙정성장 : 빙정핵형성 후 빙정성장이 급속히 일어남 공정점 : 용액을 냉각시키면 얼음 결정량은 증가하고 잔류용액량은 감소하며 온도를 더욱 낮추면 잔류용액도 얼게하는 온도점

3. 동결 융해시 세포사멸 원인

71.0

Glycerol

73.7

Ethylene Glycol

55.9

1,2 propanediol

76.1

1/036

73.5

2. 동해 방지제 평형

3. 스트로우 내 수정란 주입

Cotton (A : 공기, C : 동결보존액, E : 수정란, Seal : 봉인, Cotton : 면전부) (동결시)

1.4M

스트로우내 주입, 동결 ▼ 이식 (융해시) Seal C+E

융해 시 세포사멸 중심의 상세 내용

동물생명공학 과제 핵심 내용

수정란의 동결 1. 동결기의 종류 액체 질소 동결기 알코올 동결기 2. 동결과정 과냉각 – 빙정핵 형성 – 빙정성장 – 공정점결빙 과냉각 : 용액을 냉각시킬 때 빙점 혹은 그 이하의 온도로 내려가 도 얼지 않고 액체 상태가 유지되어진 상태 식빙(seeding) : 과냉각 상태 용액과 아주 냉각된 금속을 접촉시키 면 과냉각상태가 파괴되고 얼음형성 빙정핵형성 : 첫째과정 – 낮은온도에서 순수물분자의 빙정핵형성 두번째과정 – 용액내 이물질을 중심으로 빙정핵형성 빙정성장 : 빙정핵형성 후 빙정성장이 급속히 일어남 공정점 : 용액을 냉각시키면 얼음 결정량은 증가하고 잔류용액량은 감소하며 온도를 더욱 낮추면 잔류용액도 얼게하는 온도점 3. 동결 융해시 세포사멸 원인 세포내 동결 세포내 수분의 얼음화(crystallization) : 세포내구조 파괴 탈수에 의한 세포수축 : -15℃ 세포내 수분의 80%탈수 -30℃ 세포내수분의 거의100% 탈수 * -30℃ 에서 살아남을 수 있는 세포는 -196℃와 같은 낮은 온도 에서도 생존 세포외동결: 용질 농축 – 삼투압 상승 – pH변화 기계적 손상 융해과정시: 재결정(recrystallization)시 큰손상 얼음 결정의…

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