
세포내 동해 방지제 : 분자량이 낮고 용해성이 높으며, 수정란에 대하여 독성이 없고 빠른 침투성을 갖고 있을 것 (DMSO, Glycerol, Ethylene glycol 등) 세포외 동해 방지제 : 분자량이 큰것(Sucrose, Glucose등) Glycerol : 동결 융해 후 삼투성 쇼크를 야기시키는 경향이 있 다.
수정란의 동결
액체 질소 동결기 알코올 동결기
과냉각 – 빙정핵 형성 – 빙정성장 – 공정점결빙 과냉각 : 용액을 냉각시킬 때 빙점 혹은 그 이하의 온도로 내려가 도 얼지 않고 액체 상태가 유지되어진 상태 식빙(seeding) : 과냉각 상태 용액과 아주 냉각된 금속을 접촉시키 면 과냉각상태가 파괴되고 얼음형성 빙정핵형성 : 첫째과정 – 낮은온도에서 순수물분자의 빙정핵형성 두번째과정 – 용액내 이물질을 중심으로 빙정핵형성 빙정성장 : 빙정핵형성 후 빙정성장이 급속히 일어남 공정점 : 용액을 냉각시키면 얼음 결정량은 증가하고 잔류용액량은 감소하며 온도를 더욱 낮추면 잔류용액도 얼게하는 온도점
Glycerol
Ethylene Glycol
1,2 propanediol
1/036
Cotton (A : 공기, C : 동결보존액, E : 수정란, Seal : 봉인, Cotton : 면전부) (동결시)
스트로우내 주입, 동결 ▼ 이식 (융해시) Seal C+E
수정란의 동결 1. 동결기의 종류 액체 질소 동결기 알코올 동결기 2. 동결과정 과냉각 – 빙정핵 형성 – 빙정성장 – 공정점결빙 과냉각 : 용액을 냉각시킬 때 빙점 혹은 그 이하의 온도로 내려가 도 얼지 않고 액체 상태가 유지되어진 상태 식빙(seeding) : 과냉각 상태 용액과 아주 냉각된 금속을 접촉시키 면 과냉각상태가 파괴되고 얼음형성 빙정핵형성 : 첫째과정 – 낮은온도에서 순수물분자의 빙정핵형성 두번째과정 – 용액내 이물질을 중심으로 빙정핵형성 빙정성장 : 빙정핵형성 후 빙정성장이 급속히 일어남 공정점 : 용액을 냉각시키면 얼음 결정량은 증가하고 잔류용액량은 감소하며 온도를 더욱 낮추면 잔류용액도 얼게하는 온도점 3. 동결 융해시 세포사멸 원인 세포내 동결 세포내 수분의 얼음화(crystallization) : 세포내구조 파괴 탈수에 의한 세포수축 : -15℃ 세포내 수분의 80%탈수 -30℃ 세포내수분의 거의100% 탈수 * -30℃ 에서 살아남을 수 있는 세포는 -196℃와 같은 낮은 온도 에서도 생존 세포외동결: 용질 농축 – 삼투압 상승 – pH변화 기계적 손상 융해과정시: 재결정(recrystallization)시 큰손상 얼음 결정의…
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